Диагностика опухолевого процесса de novo и в ходе терапии. l 100% чувствительность – выявляется у каждого онкологического больного. De novo.


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
Минимальная остаточная болезнь
Диагностика с помощью проточной цитометрии
Современные технологии и новые тесты в лабораторной диагностике
Биохиммак
novo
Опухоль
морфология, ИГХ, ПЦ
Внутри клетки
цитохимия,
цитогенетика,
ПЦР, РТ ПЦР
В биологических
100% специфичность
в норме отсутствует
100% чувствительность
каждого онкологического больного
Стратегиятерапиилейкозов
Достижение клинико
гематологической
МОБ. Что это?
Полная редукция опухолевого клона
Специфическоесостояние,прикоторомуровеньбластных
клетоквкостноммозгениже
ноопухолевыйклон
определяетсядругимиметодамиописываюттермином
«минимальнаяостаточная/резидуальнаяболезнь»
клеточный хронический
лимфоцитарный лейкоз
. Терапия
Известно: иммунофенотип трансформированных клеток в дебюте
2
CD2
2
CD2
0
9
9
3
Гейт
Плюсы проточной цитометрии диагностики МОБ
Основана на отличии экспрессии антигенов
лейкозными бластами и нормальными
предшественниками, выявляя субстрат
учетом лейкоз
учетом лейкоз
Исключать нежизнеспособные клетки (в
отличие от молекулярной диагностики)
Получать количественные результаты
Не требует много времени
500
1000
1500
2009
Основныенаправления
выявленияМОБ
Нозологические группы
ОЛЛ детского возраста
ОМЛ детского возраста
Биологический материал
Костный мозг
ОМЛ детского возраста
клеточного
происхождения
Множественная миелома
ОЛ взрослых
Нейробластома
Условия выявления МОБ в лаборатории
Условия выявления
Направления реализации
биологического
Костный мозгОЛ детского и взрослого возраста, ММ,
лейкемические формы ХЛПЗ
ОЛЛ детского возраста
при наличии нейролейкоза в дебюте
или рецидиве ОЛ, ДВКЛ
температура и время доставки
Фенотип бластов в
дебюте
База данных поддерживается непрерывно с 2000 г.
Фенотип клеток
предшественников
работа с литературой
Внутрилабораторные правила
СОПы пробоподготовки, сбора и
анализа данных цитометрии и
интерпретации результатов
Мониторингнейробластомы
SS
SS
CD45
CD56
CD56
CD56
Самые частые проблемы выявления
Гемодилюция аспирата костного мозга
Отсутствие данных о фенотипе дебюта/рецидива
предшественников (окрашивание
-...)
Отсутствие контрольного материала острого лейкоза и МОБ
и программ сопоставления интерпретации результатов
Опухоль
Индуцированный ХТ или прогрессией опухоли сдвиг
Опухоль
Индуцированный ХТ или прогрессией опухоли сдвиг
экспрессии якорных маркеров и гематогон
–CD45, CD19 (MM), CD20
Костный мозг
Присутствие нормальных предшественников на разных
Трудно разделить / отличить друг от друга лейкозные бласты и нормальные
клетки предшественники на выходе из терапии
для пациентов с отсутствием
аберрантности фенотипа
Продолжительность лечения
около двух лет
ЗначимостьМОБдляжизни
Низкий уровень
Зачем?
Высокий уровень
Месяцы после установления диагноза
МетодывыявленияМОБ
Пожелания
получения данных
Воспроизводимость
Требования
высокая специфичность и
чувствительность
Иммунофенотипирование
Воспроизводимость
Точность
Иммунофенотипирование
2)RT-PCR:
генетические транскрипты
клеточного рецептора или
клеточного рецептора
Чувствительность
–0-
0,1%, т.е. 10
ядросодержащих клеток к/м
зависимость результата от
клеточности и объема образца
(костный мозг, ликвор)
этоопухолеваямасса
Морфологическая
ремиссия
Предел выявления
Поздний
Зачем?
Предел выявления
морфологии
Предел выявления
Предел выявления
проточной цитометрии
Предел выявления
2 года
5 лет
Гетерогенность В
клеток предшественников
Количественное определение МОБ
Выявлениеклетоксаберрантнымфенотипом
необходимо
длякаждойкомбинациимаркеров
-10
реально
достигаемая
чувствительность
составляет
патологических клеток
Доли от
Количество лейкоцитов приблизительно
объем
биологического материала в каждой
пробирке ≈ количество анализируемых
клеток и больше
Нестабильность фенотипа опухолевых клеток
Практика онкогематологии
множественных опухолей
Лейкозы с гетерогенной
популяцией бластов в
экспрессии маркеров
каждого клона
роста опухолей
Изменение экспрессии не
зависит от размера опухоли
Опухоли с первичной
резистентностью к ХТ
Прогрессия не всегда
Изменение экспрессии не
опухолевого процесса
отсутствие терапии в
Возможны разные пути
прогрессии для опухолей
одного гистотипа
Динамика экспрессии
даже в рамках одной
нозологии
Необходимость учета
ассоциированного
различных признаков
опухоли
Потеря экспрессии
трансмембранных белков
Омоложение фенотипа
лейкозных бластов
экспрессии
Лейкозные клетки попадают в «пустые
пространства» гистограмм, где нет
нормальных клеток предшественников
CD45
ОЛЛ: В
клетки в пространстве гистограмм
TdT/CD10/CD19
Иммунофенотипгематогонов
До 15 лет После 15 лет
TdT-/CD34-
CD10
TdT
Tdt
CD34-/TdT-
Маркеры В клеток
Субпопуляции В клеток
маркернезрел
Journal of Investigative Dermatology, 2009,
N Manjarrez
Ordun ̃o et al
ОЛЛ
CD45-
Гистограммы клеток
предшественников
Градиент созревания
Гематогон
CD58,HLADR
Три стадии созревания
гематогонов
опухолевых клеток
ОЛЛ, нормальные и трансформированные
Недооценка МОБна практике
Отсутствие адекватного спектра антител
дебют заболевания
бласты позитивны по
CD10, CD20, CD22, CD52, CD58, CD79a
TDT.
определен иммунопероксидазным методом
популяция
патологических клеток
антитела к
CD3, CD4, CD8, CD16/56, CD19, CD45
Случаи работы в регионе
два случая ОЛЛ детского возраста
антитела к
CD3, CD4, CD8, CD16/56, CD19, CD45
Результат: лимфоциты
Отсутствие фенотипа бластов в дебюте
Популяция бластных клеток экспрессирует
Оценка иммунофенотипа бластов затруднена.
В пробирке сгусток
популяция
патологических клеток
для диагностикии
ХЛЛ, гейт
Мониторинг неходжкинских В
моноциты, гранулоциты
Гистограммы клеток
предшественников
Градиент созревания
предшественников
Преобладание зрелых
клетках (ВКЛ)
фенотипа опухолевых
Частые проблемы
отсутствие информации о фенотипе клеток в дебюте
и/или до начала терапии
замена костного мозга на периферическую кровь
потеря
в ходе терапии
17-04-2008(3FC+3FCR)
28-05-2009(3FMD+4Campath)
Множественная миелома: диагностика и мониторинг
Гр
CD45
Гр
CD117
Мониторинг множественной миеломы
моноциты, гранулоциты
Маркеры сохранных
Отсутствуют
CD56, CD117
CD10,CD19,CD27, CD40,
CD117, CD56, CD45
экспрессия
опухолевых клеток
02-09-2008 CD38+CD138+CD117+CD19-CD56-
трПК 1,3% CD45negCD38+CD138+CD56+CD117+
24-11-
2009 трПК 1,3%
2010 трПК 0,45% CD45negCD38+CD138+CD56+CD117+CD19
2010 трПК 0,34%
2010 трПК 5,7%
2011 трПК 40,0%
26-04-2010
CD117
МОБприОМЛ
Фенотипические отличия лейкозных миелоидных клеток:
Экспрессия маркеров, обычно отсутствующих на миелоидных клетках
Коэкспрессия маркеров, обычно появляющихся на разных стадиях
Изменение уровня экспрессии миелоидных маркеров по сравнению с
Благодаря фенотипической гетерогенности клетки ОМЛ занимают на
гистограмме довольно значительную площадь, в отличие от бластов ОЛЛ,
гистограмме довольно значительную площадь, в отличие от бластов ОЛЛ,
Клетки ОМЛ обладают высоким уровнем светорассеяния и
аутофлюоресценции, сходными с нормальными аналогами
Для бластов при ОМЛ характерна нестабильность антигенного профиля
Бласты при ОМЛ не экспрессируют специфические антигены, которые могут без
сомнения идентифицировать лейкозные клетки в регенерирующем костном
Нестабильностьэкспрессии
гранулопоэза
Гистограммы клеток
предшественников
Градиент созревания
предшественников
Пролиферирующие
гранулоциты
Градиенты созревания
гранулоциты
CD16, CD32, CD33, CD45, CD64
несоответствующие стадии
опухолевых клеток
dimtobright
CD117
MRD 06-05-2011
De novo 10-02-2011 17 y.o.
CD117
CD117
ДГБ№1, отд. химиотерапии
лейкозов, Э.Г.Бойченко
ГБ№15, отд. гематологии,
ГБ№31, детское отделение,
ГБ№31, детское отделение,
НИИ ГиТ, отд.гематологии,
А.В.Куртова
К.Ю.Слободнюк
М.В.Горчакова
Е.Т.Полякова
О.В.Штапрова

Приложенные файлы

  • pdf 7781006
    Размер файла: 2 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий