Поместить в термостат с температурой 65 °С на 5 мин. Допускается при необходимости увеличение объема элюции до 250 мкл7 (см


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.









ИНСТРУКЦИЯ

по
применению комплекта реагентов

для
экстракции

ДНК из
биологического

материала

«
Ампл
иПрайм
®

ДНК
-
сорб
-
АМ»









АмплиПрайм
®



ООО «НекстБио»,

Российская Федерация, 111394,

город Москва, улица Полимерная, дом

8, стр. 2


стр.
2

из
13

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

................................
................................
................................
.....
3

НАЗНАЧЕНИЕ

................................
................................
................................
......................
3

ПРИНЦИП МЕТОДА

................................
................................
................................
............
4

ФОРМЫ ВЫПУСКА КОМПЛЕКТА РЕАГЕНТОВ

................................
................................
.
4

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

................................
................................
.........................
4

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

................................
................
6

СОСТАВ

................................
................................
................................
................................
8

ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

................................
.......................
8

СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ
.......................
11

ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ

................................
................
11

СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ

................................
.........
12

стр.
3

из
13

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

В настоящей инструкции применяютс
я следующие сокращения и обозначения:

ВКО
-
FL



экзогенный
в
нутренний контрольный образец

ВКО комплексный



экзогенный
в
нутренний контрольный образец

ДНК



дезоксирибонуклеиновая кислота

ИППП



инфекции, передающиеся половым путем

ОК



отрицательный кон
троль экстракции

ОКО



отрицательный контрольный образец

ПК



положительный контроль экстракции

ПКО



положительный контрольный образец

ПЦР



полимеразная цепная реакция

НАЗНАЧЕНИЕ

Комплект реагентов
«
АмплиПрайм
®

ДНК
-
сорб
-
АМ» предназначен для экстракц
ии
ДНК из
биологического материала (отделяемое

слизистых оболочек влагалища,
цервикального канала, уретры, ротоглотки, прямой кишки, конъ
юнктивы глаза,
эрозивно
-
язвенных

поражен
и
й

кожи и слизистых оболочек
;

моч
а
,

секрет
предстательной железы
)

для последующ
его
(
качественного или количественного)
исследования на наличие ДНК возбудителей ИППП, других инфекций органов
репродукции и инфекций мочевыводящих путей методом по
лимеразной цепной
реакции (ПЦР)
.

Кроме того, комплект
реагентов
«
АмплиПрайм
®

ДНК
-
сорб
-
АМ» ис
польз
уется

для
экстракции ДНК из образцов смеси б
актериальных культур, полученных

путем посева
биологического материала на жидкую или плотную питательную среду, для
последующего исследования на наличие ДНК возбудителей гнойно
-
септических
инфекций и генетич
еских маркеров антибиотикорезистентности у этих возбудителей
методом ПЦР.

Экстракция ДНК является преаналитической процедурой метода ПЦР в
клинической лабораторной диагностике.

Объем исследуем
ого образца для экстракции: 100

мкл.

ВНИМАНИЕ!

Информацию о поря
дке взятия, условиях транспортирования и
хранения исследуемого материала, необходимости и порядке его подготовки к
экстракции ДНК, а также информацию об интерферирующих веществах и
ограничениях, связанных с пробой, смотрите в инструкции к используемому наб
ору
реагентов для проведения амплификации.

стр.
4

из
13

ПРИНЦИП МЕТОДА

Исследуемый образец
1

обрабатывается лизирующим раствором в присутстви
и

частиц силики


сорбента. В результате происходит деструкция клеточных мембран,
вирусных оболочек и других биополимерных компле
ксов и высвобождение ДНК.
Растворенная ДНК в
присутствии
лизирующего раствора связывается с частицами
сорбента, в то время как другие компоненты лизированного
биологического

материала остаются в растворе и удаляются при осаждении сорбента
центрифугирование
м и
его
последующей
отмывк
е
. При добавлении
буфера

для
элюции к сорбенту происходит переход ДНК с поверхности силики в раствор, который
отделяется от частичек сорбента центрифугированием. В результате указанной
процедуры получается высокоочищенный препарат

ДНК, свободный от ингибиторов
реакции амплификации, что обеспечивает высокую

аналитическую чувствительность
ПЦР
-
исследования.

ФОРМЫ
ВЫПУСКА КОМПЛЕКТА РЕАГЕНТОВ

Комплект реагентов выпускается в
1

форм
е

комплектации:

Форма 1
включает
комплект реагентов «
Ам
плиПрайм
®

ДНК
-
сорб
-
АМ»

вариант
10
0
C
.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
-
биологические (ПЦР)
исследования
биологического

материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно
-
эпи
деми
ологических
правил СП 1.3.2322
-
08 «Безопасность работы с
микроорганизмами
III

IV групп патогенности (опасности) и возбудителями

паразитарных болезней», СанПиН
2.1.7.2790
-
10 «
Санитарно
-
эпидемиологические
требования к обращению
с медицинскими отходами» и

методических указаний
МУ
1.3.2569
-
09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I

IV групп патогенности»
.

При работе всегда следует выполнять следующие требовани
я:

-

Следует рассматривать исследуемые об
разцы как инфекционно
-
опасные,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322
-
08
«Безопасность работы с микроорганизмами
III

IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».




1

Для некоторых видов биологического материала требуется помещение материала в транспортную
среду
и/
или этап пробоподготовки, см. инструкцию к используемому набору реаген
тов для
проведения
амплификации.

стр.
5

из
13

-

Уби
рать и дезинфицировать разлитые образцы или
реагенты
, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322
-
08 «Безопасность
работы с микроорганизмами
III

IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».

-

Лабораторный про
цесс должен быть однонаправленным. Анализ
проводит
ь
ся

в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне
Экстракции
,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реа
генты

в зону, в которой была проведена

пред
ыдущая стадия
процесса.

-

Неиспользованные реа
генты
, реа
генты

с истекшим сроком годности, а также
использованные реа
генты

следует удалять в соответствии с требованиями
СанПиН 2.1.7.2790
-
10 «
Санитарно
-
эпидемиологические требования к обращению
с медицинскими о
тходами»
.

-

Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром
2
.

Одноразовую пластиковую посуду
необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий
дезинфицирующ
ее средство, которое может быть испо
льзовано для
обеззараживания медицинских отходов.

-

Комплект

реагентов предназначен для одноразового

применения для проведения
исследования указанного количества проб (см. раздел «Состав»).

-

Комплект реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Пр
именять
комплект
реагентов
строго по назначению.

-

К работе с
комплектом

реагентов допускается только персонал, обученный
методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико
-
диагностической лаборатории в установленном порядке

(СП 1.3.2322
-
08
«Безопа
сность работы с микроорганизмами III

IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней»)
.

-

Не использовать комплект реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или
внешний вид реагента не соответствует описанию.

-

Не использовать компле
кт реагентов, если не соблюдались условия
транспортирования и хранения

согласно инструкции
.

-

Не использовать

комплект
реагентов
по истечении срока годности.

-

Использовать

одноразовые
неопудренные
перчатки, лабораторные халаты,
защищать глаза во время работы
с образцами и реа
гентами
. Тщательно вымыть



2

Для
удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции используются одноразовые наконечники без
фильтра.

стр.
6

из
13

руки по окончании работы.

Все операции проводятся только в перчатках для
исключения контакта с организмом человека.

-

Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте
немедленно промыть поражен
ное

место водой и обратиться за медицинской
помощью.

-

Листы безопасности
реагентов

(SDS


S
afety data sheet) доступны по запросу.

Оценка
вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти
отрицательные последствия

для организма человека

При

использовании по назначению

и соблюдении вышеперечисленных мер
предосторожности контакт с организмом человека исключен. При аварийных
ситуациях
возможно следующее
:

-

раздражение слизистой обо
лочки глаз у чувствительных лиц,

-

раздра
жение кожи у чувствительных

лиц,

-

аллергическая реакция,

-

вред при вдыхании
,

-

вред при приеме внутрь
.

Специфические воздействия
комплекта

реагентов на организм человека:

-

Канцерогенный эффект отсутствует.

-

Мутагенное действие отсутствует.

-

Репродуктивная токсичность отсутствует.

ДОПОЛНИТЕ
ЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

1.

Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно зак
рывающиеся
пробирки объемом 1,5

мл (например, Axygen
,
Inc
.

(«Эксиджен, Инк»),

США
, или
аналогичны
е
).

2.

Завинчивающиеся крышки к пробиркам (например, Axygen,
Inc
. («Экси
джен,
Инк.»), США, или аналогичные).

3
.

Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фи
льтром до
100, до 200 и до 1000

мкл (например, Axygen
,
Inc
.

(«Эксиджен, Инк»)
, США
,

или
аналогичны
е
).

4
.

Одноразовые наконечники для дозаторов переменного
объема до 200

мкл
(например, Axygen
,
Inc
.

(«Эксиджен, Инк»)
, США
,

или аналогичны
е
).

5
.

Ш
тативы для пробирок объемом 1,5

мл (например,
Axygen
,
Inc
.

(«Эксиджен, Инк»)
,
США
,

или аналогичны
е
).

6
.

Л
аминарный бокс

класс биологической безопасности II тип А
(напри
мер,
«БАВп
-
01
-
«Ламинар
-
С
.
»
-
1,2
»,
ЗАО
«Ламинарные системы», Россия,

или аналогичный
).

стр.
7

из
13

7
.

Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» с максимальной скорость
ю
центрифугирования не менее 12

тыс g (например, MiniSpin

(
Eppendorf

Manufacturing Corporation («Эппендорф Мануфэктуринг Корпорэйшн»)
, Германия)

или аналогичны
е
)
.

8
.

Вортекс (например,
SIA

Biosan
, Латвия, или аналогичный
).

9
.

Термостат для пробиро
к типа «Эппендорф» от 25 до 100

°С (например,
SIA
BioSan, Латвия
,

или аналоги
чный
).

10
.

Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой
-
ловушкой для удаления
надосадочной жидкости (например, «ОМ
-


(
ООО
«Утес»
, Россия
)
, или
аналогичный
).

11.

Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичны
е
).

12.

Холод
ил
ьник от 2 до 8

°С с морозильной
камерой от минус 24 до минус 16

°
С.

13.

Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569
-
09.

14.

Одноразовые пластиковые контейнер
ы для сброса и инактивации материалов.

стр.
8

из
13

СОСТАВ

Комплект реагентов «
АмплиПрайм
®

ДНК
-
сорб
-
АМ»

вариант 100С



комплект
реагентов для экстракции
Д
НК
из
биологического

материала


включает
:

Реагент

Описание

Объем, мл

Количество

Лизирующий раствор

Прозрачная бесцветная
жидкость
3

30

1 флакон

Отмывочный раствор

Прозрачная бесцветная
жидкос
ть

100

1 флакон

Сорбент универсальный

Суспензия белого цвета

1,0

2 пробирки

Буфер для элюции В

Прозрачная бесцветная
жидкость

5,0

3 пробирки

ВКО
-
FL

Прозрачная бесцветная
жидкость

1,0

1 пробирка

ВКО

комплексный

Прозрачная бесцветная
жидкость

1,0

1 проби
рка

ОКО

Прозрачная бесцветная
жидкость

1,2

2 пробирки

Комплект реагентов вариант 100
С

рассчитан на экстракцию ДНК из 100 проб,
включая контроли.

ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

Подготовка к проведению процедуры
экстракции

ДНК

1.

Включить термостат и

установить температуру 65

°С.

2.

П
рогреть
л
изирующий раствор
,
если он хра
нился при температуре от 2 до 8

°
С,

периодически
перемешивая
,

при температуре 65

°
С до полного растворения
кристаллов.

3.

Отобрать необходимое количество одноразовых полипропиленовых проби
р
ок
объемом 1,5

мл с завинчивающимися или плотно закрывающимися крышками
(включая отрицательный и положительный контроли экстракции, если они
предусмотрены для проведения ПЦР
-
исследования).
Промаркировать.

4.

Подготовить и расставить в штативе пробирки с

биоло
гическими

образцами.
О
садить капли материала со стенок пробирки и внутренней части крышки
на
вортексе
, после чего аккуратно перемешать содержимое пробирки на вортексе,
избегая разбрызгивания и попадания материала на внутреннюю часть крышки.

Процедура
экстр
акции

ДНК

1.

Внести в

подготовленные
одноразовые

пробирки
по
10

мкл
ВКО
комплексного

или
ВКО
-
FL

в зависимости от метода детекции продуктов ПЦР (см.
инструкцию к
набору реагентов для проведения амплификации
). При использовании наборов
стр.
9

из
13

реагентов с разными метод
ами

детекции допускается внесение в одну пробирку
д
вух
реагентов ВКО
по 10

мкл каждого.

2.

Ресуспендировать
сорбент
универсальный
, интенсивно перемешивая на
вортексе. В
нести в каждую пробирку по
20

мкл
ресуспендированного
сорбента
универсального
, после чего в
нести по
300

мкл лизирующего раствора
.

ВНИМАНИЕ!

Если количество обрабатываемых биологических образцов составляет
более 50 за рабочую смену, рекомендуется добавить весь

объем сорбента и ВКО во
флакон с лизирующим раствором (2

мл сорбента универсального и 1

мл ВКО на
30

мл лизирующего раствора). Полученную суспензию тщательно перемешать и
внести по 330

мкл в подготовленные пробирки. Допускается хранение смеси не более
2

сут при комнатной температуре. Перед применением суспензию тщательно
перемешать.

3.

Внести
в

пробирки с ВКО, лизирующим раствором и сорбентом универсальным по
100

мкл

исследуемых образцов
4
,

5
, используя для каждой пробы о
тдельный

наконечник с фильтром.

4.

В пробирку отрицательного контроля
(ОК)

экстракции внести
1
00

мкл ОКО
4
,

в
пробирку положительно
го контроля
(ПК)

экстракции внести
90

мкл

ОКО
4

и
10

мкл

ПКО
4

(если он предусмотрен для проведения ПЦР
-
исследования)
6
.

5.

Плотно закрыть крышки,
тщательно

перемешать на вортексе. Поместить пробирки
в термостат с температурой
65

°С

на
5

мин
. Перемешать на ворте
ксе
и оставить в
штативе при комнатной температуре на
2

мин
.

6.

Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение
30

сек

при
7

тыс
g

(
например, 10

тыс

об/мин для микроцентрифуги MiniSpin,
Eppendorf Manufacturing
Corporation
)
.

7.

Не
захватывая сорбент, удали
ть надосадочную жидкость
из каждой пробирки
отдельным
наконечником без фильтра на 200

мкл, используя вакуумный
отсасыватель
.

8.

Добавить в проб
ирки

по
1

мл

отмывочного раствора
,

перемешать на вортексе
до полного ресуспендирования сорбента.

9.

Повторить п
п. 6
-
7
.







3

При хранении
лизирующего раствора

при температуре
от 2 до 8


С

возможно образование осадка в

виде кристаллов.

4

Допускается изменение объема исследуемых и контрольных образцов, см. инструкцию к
используемому набору реагентов для проведения амплификации.

5

Для образцов мочи необходимо произвести предобработку согласно
инструкции к набору реагентов
для амплификации
.

6

Результаты
постановки

контролей этапа экстракции используются при оценке достоверности

результатов ПЦР
-
исследования биологических образцов. Анализ и оценка результатов для контролей
проводится согласно инструкции к набору реагентов для

проведения
амплифик
ации.

стр.
10

из
13

10.

Поместить пробирки
с открытыми крышками
в термостат с температурой
65

°
С

на
5

мин

для подсушивания сорбента.

11.

Добавить в

пробирки по
100

мкл

буфера

для элюции В
. Перемешать на вортексе
до полного ресуспендирования сорбента. Поместить в термостат с температу
рой
65

°С

на
5

мин
. Допускается при необходимости увеличение объема
элюции до
2
50

мкл
7

(см. инструкцию к набору реагентов для проведения амплификации)
.

12.

Центрифугировать пробирки
на микроцентрифуге в течение

1

мин

при
10

тыс

g

(
например, 12

тыс

об/мин для м
икроцентрифуги MiniSpin,
Eppendorf Manufacturing
Corporation
)
.

Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК. Пробы готовы к
постановке

ПЦР.

Очищенная ДНК может храниться при температуре от 2 до 8

°С в течение недели,
при температуре от минус 24 до минус 16

°С в течение года. Для этого необходимо,
не захватывая сорбент, перенести надосадочную жидкость в стерильную пробирку.




7

Количество буфера для элюции, входящего в состав комплекта реагентов, рассчитано на проведение
элюции в 150 мкл. В случае если для проведения амплификации требуется увеличение объема элюции
до 250 мкл, дополнительное количество буфера для элюции вх
одит в состав набора реагентов для
проведения амплификации.

стр.
11

из
13

СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ

Срок годности.
12 мес. Комплект реагентов с истекшим сроком годности
применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку
годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.

Транспортирование.

Комплект реагентов транспортировать
при температуре от 2 до
8

°С

не более
7

су
т.

Допускается транспортирование
при температуре от 2 до 25

°
С не
более 3

сут.

При получении разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.


Хранение.

Комплект реагентов хра
нить при температуре от 2 до 25

°С, кроме ВКО
комплексного и

ВКО
-
FL. ВКО комплекс
ный и

ВКО
-
FL хранить при температуре от 2 до
8

°
С
.

ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ

П
роизводитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
комплекта

реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуата
ционной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.

Рекламации на качество комплекта реагентов

«
АмплиПрайм
®

ДНК
-
сорб
-
АМ»

направлять
в

адрес

предприяти
я
-
производител
я

ООО «НекстБио»

(
111394 г. Москва,
ул. Полимерная, 8 стр.2
)
в отдел по работе с рекламациями (тел.
(495) 620
-
08
-
73
,
e
-
mail
:
info
@
nextbio
.
ru
).

При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
комплекта реагент
ов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации
комплекта

реагентов, рекомендуется
направить сообщение в отдел по работе с рекламациям
и по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ


Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с
действующим законодательством.


стр.
12

из
13

СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ


Номер в каталоге


Максимальное
число тестов


Код партии


Использовать до


Изделие для
in

vitro

диагностики


Применять
согласн
о
прилагаемой
инструкции


Дата изменения


Производитель


Ограничение
температуры


Дата изготовления


Хрупкое
. Осторожно


Верх


Беречь от влаги




стр.
13

из
13

Лист вносимых изменений

Редакция

Место внесения
изменений

Суть вносимых изменений

21.11.2014

На
значение

В перечень биологического материала добавлен
секрет предстательной железы.



Приложенные файлы

  • pdf 7854171
    Размер файла: 316 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий